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冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析

更新時間:2025-10-17      點擊次數(shù):171
一招教會你高效制備玻璃化樣品

在冷凍電鏡技術中,樣品冷凍質量直接決定最終成像分辨率。投入冷凍法(Plunge Freezing)作為很常用的冷凍固定技術,以其操作簡便、成本低廉的優(yōu)勢,成為單顆粒分析的方法。

投入冷凍技術原理

投入冷凍技術通過將樣品載網(wǎng)直接投入-196℃的液態(tài)乙烷/丙烷中,實現(xiàn)超高速冷卻,使樣品中的水形成非晶態(tài)冰(玻璃態(tài)冰)而非破壞性的六方晶冰。

關鍵步驟:

  • 樣品應用:將3-5μL樣品滴在電鏡載網(wǎng)上

  • 濾紙吸樣:用濾紙從邊緣吸除多余液體,形成薄液膜

  • 快速投入:機械臂快速將載網(wǎng)投入液態(tài)乙烷中

  • 液氮保存:將冷凍后的樣品轉移至液氮中存儲

冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析

編輯搜圖

技術優(yōu)缺點分析

優(yōu)勢:

  • 操作簡單快速,單個樣品僅需幾分鐘

  • 成本低廉,無需復雜設備

  • 能夠保存表面納米結構

  • 適合大批量樣品的快速制備

    局限性:

    • 僅能處理<200nm超薄層樣品

    • 厚樣品內(nèi)部易形成冰晶

    • 需要優(yōu)化樣品濃度和緩沖條件

    • 對樣品均勻性要求較高


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    適用樣品類型

    投入冷凍技術特別適合以下樣品:

    • 病毒顆粒(流感病毒、新冠病毒等)

    • 蛋白質溶液(膜蛋白、復合體等)

    • 脂質體及納米顆粒

    • 核糖體及其他大分子復合物

    • 單層細胞及細胞器懸液

    手動 vs. 自動投入冷凍對比表

    技術參數(shù)

    手動投入冷凍

    Leica EM GP2 自動投入

    ?操作難度

    高(需熟練技巧)

    低(一鍵啟動)

    重現(xiàn)性

    低(依賴操作者)

    高(程序化控制)

    環(huán)境控制

    溫濕度可控(4-60℃, 99%)

    樣品通過率

    30-50%

    >90%

    液層一致性

    差異較大

    高度均一

    適用用戶

    有經(jīng)驗研究者

    所有級別用戶

    Leica EM GP2自動投入冷凍儀:

    精準控制的冷凍專家

    全自動機械控制環(huán)境參數(shù)可編程設計,有效解決手動操作的不確定性問題。其內(nèi)置的溫濕度控制艙(4-60℃, 濕度最高99%)能有效防止樣品溶液揮發(fā),確保實驗條件的高度重復性。

    冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析

    Leica EM GP2 溫度/濕度/二次冷凍劑溫度調(diào)節(jié)界面

    Leica EM GP2 調(diào)整二次冷凍劑溫度,在實現(xiàn)快速液化的同時,可定義不同的冷凍溫度,獲得更佳的冷凍結果。

    編輯搜圖

    冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析

    EM GP2配備智能吸濾系統(tǒng),通過精確定時控制濾紙接觸樣品的力度和時間,確保每個樣品都能形成厚度均勻的薄液層。機械投擲裝置以高度一致的速度和角度將樣品投入冷凍劑,實現(xiàn)超高冷卻速率,確保水分子玻璃化。

    冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析


    冰層厚度均勻

    冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析

    冰層厚度不均勻


    應用案例展示

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    病毒顆粒

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    微管

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    細菌

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    細胞

    核心功能:

    • 環(huán)境參數(shù)可調(diào):溫度(4-60℃)和濕度(最高99%)精確控制

    • 過程全自動:從吸濾到投入全程程序化操作

    • 冷凍劑溫度可調(diào):快速液化,且可實現(xiàn)特定溫度冷凍

    • 高重現(xiàn)性:確保每個樣品獲得一致的冷凍條件

    • 防污染設計:封閉式工作艙避免環(huán)境污染

    • 用戶友好:觸摸屏控制,操作簡單易學

    該儀器特別適合病毒學研究蛋白質結構分析,能夠大幅提高樣品制備成功率和數(shù)據(jù)質量,是單顆粒分析研究的理想選擇。

    冷凍電鏡樣品怎么凍?投入冷凍技術全解析

    選擇正確的冷凍方法,

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    EM GP2自動投入冷凍儀

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